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在粗酶溶液中纯化PPO
      实验程序
在葡萄糖凝胶1上进行过滤色谱。
葡聚糖凝胶处理,包装和平衡(1)柱处理称取一定量的干粉Sephadex G-200,加入非离子水或蒸馏水浸泡48小时,去除悬浮颗粒,防止颗粒。空气的存在会影响色谱效果。在填充凝胶之前,必须除去凝胶中的气体。该方法包括将凝胶溶液置于滤瓶中并将其吸入凝胶溶液中。
(2)填料柱将色谱柱支架上的色谱柱洗涤并垂直固定。加入三分之一量的非离子水并打开下部液体出口以平滑水流。液体(如果凝胶浓度过高,会产生气泡,影响蛋白质的分离速度。如果浓度过低,可能会发生凝胶剥离,影响蛋白质分离效果。,凝胶自然地贴合在层中。
将包装停在5至2厘米处并切割一块等于柱内径的滤纸以覆盖凝胶。
色谱柱顶部连接恒流泵,下端口连接蛋白质监测器,直至色谱柱平衡。
(3)平衡色谱柱必须在柱色谱前平衡。所谓的平衡是用色谱步骤的缓冲液(洗脱液)代替柱中的溶液以产生柱,缓冲系统在柱色谱中与系统一致。
该方法包括使用色谱柱顶部的恒流泵泵送色谱柱中的平衡缓冲液,并打开色谱柱底部的输出,和包括在内。它是零。
当出口流出物的pH与平衡缓冲液的pH相同时,柱达到平衡,为5-1ml / min。
在这个实验中我们使用0。
002 M Tris-HCL缓冲液PH7。
4(包括0)
0001M EDTA),平衡的Sephadex G-200凝胶。
装载:将粗酶溶液施加到柱上。
3.描述:使用0。
02 M Tris-HCL缓冲液Ph7。
4(包括0)
收集洗脱液用于分析酶活性的基本性质,蛋白质的浓度和聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子量。
测定酶活性和蛋白质浓度。
发展


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